Nûçexane - Danasîna teknolojiya derxistina asîda nukleîk

ⅠNucleic acididanasînê

Asîda nukleîk di nav asîdên deoksîrîbonukleî (ADN) û asîda ribonukleî (ARN) de tê dabeşkirin, di nav wan de ARN li gorî fonksiyonên xwe yên cihê di nav ARNya rîbozomî (rRNA), RNA peyamber (mRNA) û RNA (tRNA) veguhezîne.ADN bi giranî di navok, mîtokondrî û kloroformê de ye, lê RNA bi giranî di nav sîtoplazmayê de belav dibe.Wekî bingeha maddî ya vegotina genê, derxistina asîda nukleîk di lêkolîna biyolojiya molekulî û tespîtkirina molekularî ya klînîkî de rolek pir girîng dilîze.Kêmbûn û paqijiya derxistina asîda nukleîk rasterast dê bandorê li ser PCR, rêzgirtin, avakirina vektor, digestiya enzîmê û ceribandinên din ên paşîn bike.

Ⅱ Rêbaza derxistin û paqijkirina asîda nukleîk

① Rêbaza derxistina fenol / kloroform

Derxistina fenol / kloroform rêbazek klasîk e ji bo derxistina ADNyê, ku bi giranî du halên organîk ên cihêreng ji bo dermankirina nimûneyan bikar tîne, di qonaxa avê de asîda nukleîk a bingehîn a DNA, di qonaxa organîk de lîpîd, û proteînên di navbera her du qonaxan de vedihewîne.Ev rêbaz xwedî avantajên lêçûna kêm, paqijiya bilind û bandorek baş e.Dezavantajên operasyonên tevlihev û demdirêj in.

② Rêbaza Trizol

Rêbaza Trizol ji bo derxistina RNA rêbazek klasîk e.Rêbaza Trizol piştî santrîfugasyonê bi kloroformê di qonaxa avî û qonaxek organîk de tê dabeş kirin, ku tê de RNA di qonaxa avî de tê hilweşandin, qonaxa avî tê veguheztin boriyek nû ya EP, barîn piştî lê zêdekirina isopropanol, û dûv re jî paqijkirina etanolê tê wergirtin.Ev rêbaz ji bo derxistina RNA ji tevnên heywanan, xaneyên û bakteriyan minasib e.

③ Rêbaza paqijkirina stûna navendî

Rêbaza paqijkirina stûna santrîfujê dikare bi taybetî bi navgîniya materyalên adsorpsiyonê yên matrixa siliconê ya taybetî ve DNA-yê bişewitîne, dema ku RNA û proteîn dikarin bi rêkûpêk derbas bibin, û dûv re jî xwêya bilind PH-ya nizm bikar bînin da ku asîdeya nukleîîk, xwêya kêm nirxa PH-ya bilind elusyona ji hev veqetandin û paqijkirina asîda nukleîk bikar bînin.Awantajên mezinbûna paqijkirina bilind, îstîqrara bilind, ne hewcedariya helwêstê organîk, û lêçûna kêm e.Kêmasî ev e ku pêdivî ye ku ew gav bi gav were santrîfûj kirin, bêtir gavên operasyonê.

④ Rêbaza mûçikên magnetîkî

Rêbaza mûçikên magnetîkî ev e ku nimûneya tevna şaneyê bi lîzatê veqetîne, asîdeya nukleîîk di nimûneyê de berde, û dûv re molekulên asîdên nukleîîk bi taybetî li ser rûyê bejna magnetîkî têne veguheztin, dema ku nepakiyên wekî proteîn û şekir di nav de têne hiştin. şil.Bi gavên perçebûna tevna şaneyê, girêdana bejna magnetîkî ya bi asîda nukleîk, şuştina asîda nukleîîk, şûştina asîda nukleîk û hwd, di dawiyê de asîda nukleîk a paqij tê bidestxistin.Feydeyên operasyona hêsan û karanîna demek kurt in, bêyî ku hewcedariya santrîfujasyona gavê hebe.Ew pêdiviyên teknîkî yên kêm heye û dikare operasyona otomatîk û girseyî pêk bîne.Kombînasyona taybetî ya mûçika magnetîkî û asîda nukleîk asîda nukleîk a ku hatî derxistin bi giranî û paqijiya bilind çêdike.Kêmasî ev e ku bihayê bazarê yê heyî biha ye.

⑤ Rêbazên din

Ji bilî çar awayên jorîn, şilkirina kelandî, rêbaza xwêya konsantrekirî, rêbaza paqijkirina anionîk, rêbaza ultrasonic û rêbaza enzîmatîk, hwd.

Ⅲ Cureyê derxistina asîda nukleîk

Foregene xwedan platforma PCR-ya rasterast a cîhanê ye, platforma veqetandina RNA-ya du-stûnî (tenê DNA-tenê + RNA).Berhemên sereke kîtên îzolekirina DNA / RNA, PCR û reagentên rasterast PCR rêzikên laboratûara molekulê hene.

① Bi tevahî derxistina RNA

Nimûneyên derxistina RNA ya tevahî xwîn, şan, tevnên heywanan, nebat, vîrus, hwd hene. Paqijiya bilind û giraniya zêde ya RNA-ya tevahî dikare bi derxistina RNA-ya tevahî were bidestxistin, ku dikare di RT-PCR, analîza çîpê, wergera in vitro de were bikar anîn, klonkirina molekulî, Dot Blot û ceribandinên din.

Foregene têkildarKîtên îzolekirina RNA

Animal Total Isolation RNA Kit--Zû û bikêrhatî RNA-ya tevahî ya paqijiya bilind û kalîteya bilind ji tevnên cûrbecûr yên heywanan derdixin.

Kîta îzolekirina RNA ya tevhev--Di 11 hûrdeman de RNA-ya tevahî ya pir paqijkirî û bi kalîte dikare ji şaneyên cûda yên çandî were bidestxistin.

Plant Total RNA Îsolation Kit--Bi lez û bez RNA-ya tevahî-kalîteya bilind ji nimûneyên nebatê bi naveroka polîsakarîd û polîfenolê kêm derxînin.

Kîta îzolekirina RNA ya vîrusê--Bi lez û bez ARNya vîrusê ji nimûneyên wekî plazma, serum, şilavên laş ên bê şaneyek û zêrên çanda şaneyê veqetînin û paqij bikin.

② Derxistina DNA ya genomîk

Nimûneyên derxistina DNA-ya genomîk ax, fec, xwîn, hucre, tevnên heywanan, nebat, vîrus, hwd hene. Derxistina DNA-ya genomîk dikare di xwarina enzîmê, avakirina pirtûkxaneya DNA, PCR, amadekirina antîpodê, analîza hîbrîdîzasyona blota rojavayî, çîpê genê, bilind de were bikar anîn. -Rêzkirina rê û ceribandinên din.

Foregene têkildarKîtên tecrîdê yên DNA

Animal Tissue DNA Isolation Kit--Çêkirin û paqijkirina bilez a ADNya genomîk ji gelek jêderan, wek tevnên ajalan, şan û hwd.

Kîta Midi DNA ya xwînê (1-5 ml)--Bi lez û bez ADNya genomîk a kalîteya bilind ji xwîna antîkoagulated paqij bike (1-5ml).

Swab Buccal / Kit îzolekirina DNA ya Karta FTA--Zû bi lez DNA-ya genomîkî ya kalîteya bilind ji nimûneyên swaba buccal / Karta FTA paqij bikin.

Kit îzolekirina DNA ya nebatê--Ji nimûneyên nebatan (tevî nimûneyên nebatê yên polîsakarîd û polîfenol) ADNya genomîkî ya bi kalîte zû paqij bikin û bistînin.

③ Derxistina plazmîdê

Plasmîd celebek ADN-ya molekulê ya piçûk a dorhêl e ku di nav şaneyan de hilgirê hevpar e ji bo veavakirina DNA.Rêbaza derxistina plasmîdê rakirina ARN, veqetandina plasmîdê ji ADNya genomî ya bakterî, û rakirina proteîn û nepaqijiyên din e ku plasmîdek nisbeten paqij bi dest bixe.

General Plasmid Mini Kit--Ji bo ceribandinên rûtîn ên biyolojiya molekulî yên wekî veguherandin û helandina enzîmê bi lez û bez ADNya plasmidê ya qalîteya bilind ji bakteriyên veguherî paqij bikin.

④ Cûreyên derxistina din, derxistina miRNA, hwd.